精誠醫(yī)學(xué)情報中心通訊 第2期

液體活檢通過非侵入性的取樣方式獲得腫瘤信息，輔助癌癥治療，是精準(zhǔn)醫(yī)療代表性的診斷技術(shù)。其主要檢測物包括血液中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells，CTCs)、循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA，ctDNA)和外泌體(exosomes)。作為液體活檢領(lǐng)域的"三駕馬車"之一，外泌體是細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要載體，具有豐富的可檢測靶標(biāo)(蛋白、DNA、RNA、脂質(zhì)等)。目前已經(jīng)大量的證據(jù)表明外泌體及其內(nèi)容物具有成為新型診斷標(biāo)志物的潛能，但其真正應(yīng)用于臨床仍面臨很多挑戰(zhàn)。

2018年12月，中國首個《外泌體研究、轉(zhuǎn)化和臨床應(yīng)用專家共識》（以下簡稱“共識”）^[1]由中國抗癌協(xié)會腫瘤標(biāo)志專業(yè)委員會外泌體技術(shù)專家委員會在《轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志》上發(fā)布，本共識由中國抗癌協(xié)會腫瘤標(biāo)志專業(yè)委員會外泌體技術(shù)專家委員會主任委員、暨南大學(xué)張灝教授領(lǐng)銜的專家團(tuán)隊撰寫。旨在促進(jìn)國內(nèi)外泌體特別是外泌體腫瘤標(biāo)志物的產(chǎn)學(xué)研結(jié)合，推動相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范的建立，理性引導(dǎo)技術(shù)轉(zhuǎn)化，并服務(wù)于民生。這是國內(nèi)權(quán)威發(fā)布的第一個外泌體研究臨床轉(zhuǎn)化的專家共識，目前可以在《轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志》官網(wǎng)上免費下載，界面見圖1。中國知網(wǎng)亦可檢索下載，界面如圖2。

共識發(fā)布后一周內(nèi)，有關(guān)網(wǎng)站如“搜狐·健康”、“今日頭條”、“中國體外診斷網(wǎng)”、“轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)網(wǎng)”等相繼報道，清冷冬日都感受到了外泌體研究的熱乎勁。

共識首先介紹了外泌體的生物學(xué)基礎(chǔ)知識和臨床應(yīng)用方向：細(xì)胞外囊泡(extracellular vesicles，EVs)是由細(xì)胞分泌的具有磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的囊泡，能夠通過其攜帶的生物大分子，調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)特性，參與細(xì)胞的生理學(xué)和病理生理學(xué)過程。外泌體是EVs一個重要的亞群，通常被認(rèn)為是經(jīng)由多泡體與細(xì)胞膜融合而釋放到細(xì)胞外的，直徑為40～100 nm的膜性囊泡狀小體。檢測外泌體標(biāo)志物，能夠?qū)崟r動態(tài)地反映患者的疾病狀態(tài)，因此在疾病的早期篩查、無創(chuàng)診斷、療效監(jiān)控、輔助用藥等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。此外，其作為藥物載體的潛在形式，在腫瘤等疾病的治療中也展現(xiàn)出誘人的潛力。

共識繼而介紹了外泌體的分離和提取方法：主要包括超速離心法、超濾法、排阻色譜法、免疫磁珠法、聚乙二醇沉淀法等。到目前為止，外泌體的分離方法還沒有公認(rèn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但共識專家對未來會出現(xiàn)更好的EVs分離技術(shù)抱有積極態(tài)度，并建議根據(jù)外泌體的特性“量身定制”分析方法和檢測手段。

至此時，外泌體研究的標(biāo)準(zhǔn)化尚未達(dá)成，共識建議無論是樣本收集、處理、還是外泌體鑒定表征，在條件允許的情況下，可嚴(yán)格按照國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(International Society for ExtracellularVesicles，ISEV)意見書中的要求來開展研究。為滿足更多研究需要，建議在實際操作中詳細(xì)記錄實驗細(xì)節(jié)，增加相應(yīng)的質(zhì)控環(huán)節(jié)，并建立完善的對照組，以評估該因素對實驗結(jié)果的影響。另外，對產(chǎn)物中非外泌體或非EVs雜質(zhì)等含量進(jìn)行表征，又或者設(shè)法耗盡非EVs雜質(zhì)及其生物學(xué)活性，可能有助于提高研究結(jié)果的可靠性。

以關(guān)鍵詞“exosomes”在https://www.clinicaltrials.gov/檢索到外泌體相關(guān)的臨床試驗有103項，將檢索結(jié)果分類匯總?cè)缦聢D3和圖4：

以關(guān)鍵詞“外泌體”在http://www.chinadrugtrials.org.cn/暫時沒有檢索到外泌體相關(guān)的臨床試驗數(shù)據(jù)。

以關(guān)鍵詞“外泌體”在http://www.chictr.org.cn/檢索到外泌體相關(guān)的臨床試驗有26項，將檢索結(jié)果分類匯總?cè)缦聢D5：

從以上簡示圖中，我們發(fā)現(xiàn)外泌體涉及的臨床試驗中，主要有診斷標(biāo)志物、治療應(yīng)用和藥物載體等幾個方向，其中收集生物學(xué)樣本以檢測外泌體本身或其攜帶的基因或蛋白組學(xué)為評估指標(biāo)的臨床試驗占比最大。

以上有關(guān)外泌體的臨床試驗數(shù)據(jù)（截至2019.01.07）經(jīng)由小編初步整理匯總，僅供大家參考，實時數(shù)據(jù)請以各平臺實時檢索結(jié)果為準(zhǔn)。

外泌體作為一種新興的診斷標(biāo)記物及藥物載體，要實現(xiàn)由基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用的真正轉(zhuǎn)化，還要面對許多問題和挑戰(zhàn)：從分離提取分析和生產(chǎn)批次再現(xiàn)性，到產(chǎn)品的臨床定位和經(jīng)濟(jì)可行性，以及確定產(chǎn)品本身有意義的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。就產(chǎn)品安全性而言，作為衍生自哺乳動物細(xì)胞的療法，還存在共分離內(nèi)源性病毒的風(fēng)險^[2]。這些問題需要在臨床研究之前或同時進(jìn)行充分研究，然后才能考慮將外泌體輸送到臨床上供患者安全使用。

目前，將外泌體作為疾病診斷的分子標(biāo)記物所存在的主要問題有兩個：一是傳統(tǒng)方法獲得的外泌體純度和得率都較低，難以實現(xiàn)高通量的檢測；二是目前缺少有效的快速檢測外泌體表征的技術(shù)方法。除此之外，外泌體在體外長時間儲存的方法也有待優(yōu)化。利用外泌體進(jìn)行靶向給藥的主要問題也有兩個：一是天然外泌體囊泡表面含有多種不同配體或受體分子，作為藥物載體進(jìn)行靶向給藥時的臨床靶向性和可控性較低；二是對天然外泌體進(jìn)行特定的改造，雖然靶向性得到一定的提升，但是在一定程度上也喪失了外泌體內(nèi)源性的先天優(yōu)勢^[3]。

從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化之路幽深漫漫、其修遠(yuǎn)兮，需要各方團(tuán)隊并肩合作、共同推進(jìn)，比如臨床專家主導(dǎo)理念，基礎(chǔ)專家實現(xiàn)技術(shù)和理論研究的突破，資本和市場提供橋梁支撐。其中，基礎(chǔ)專家需要與臨床專家溝通獲取真正有臨床需求和前瞻性的方向，然后用基礎(chǔ)的技術(shù)和手段找到實際可行的解決方案；同時需要對政策實時跟進(jìn)、對市場精準(zhǔn)把握、對資本合理調(diào)配，更需要解決生產(chǎn)的規(guī)?；鸵?guī)范化、申報等一系列問題。

文末，小編衷心祝愿正在或?qū)⒁M(jìn)行外泌體研究的企業(yè)、醫(yī)院、公司等精誠合作，一路披荊斬棘，實現(xiàn)突破，盡早揭開外泌體的神秘面紗，為疾病的臨床診斷和治療提供新的手段。

[1]張灝,趙立波,葉國棟.外泌體研究、轉(zhuǎn)化和臨床應(yīng)用專家共識[J].轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志,2018,7(06):321-325.

[2] Colao I L , Corteling R , Bracewell D , et al. Manufacturing Exosomes: A Promising Therapeutic Platform[J]. Trends in Molecular Medicine, 2018: S1471491418300066.

[3]程顯達(dá),王浩,李慶偉.外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物及藥物載體的應(yīng)用前景[J].中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報,2018,34(12):1280-1285.

編輯：李金鳳、范婷婷、王萍、許慧、景成、劉素平、高妮

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